Заказать звонок
Заказать звонок
С того момента как эмбриолог получает пробирку с фолликулярной жидкостью, начинается эмбриологический этап процедуры ЭКО. Мы описали все основные процессы, которые происходят в эмбриологической лаборатории: оплодотворение, культивирование, биопсия трофэктодермы для проведения генетической диагностики (PGT-A), крио- , расконсервация и хранение биоматериала, а также работа с тканями яичника для сохранения фертильности.
Полученные в результате пункции фолликулов яйцеклетки в чашке Петри помещают в инкубатор. В это время эмбриологи определенным образом подготавливают сперму для их оплодотворения.
Через 2-4 часа проводится оплодотворение: сперматозоиды в строго определенном количестве добавляют к каждой яйцеклетке, после чего чашки возвращают в инкубатор.
Результаты оплодотворения оцениваются на следующее утро. В последующие дни эмбриологи оценивают развитие эмбрионов. На пятый день развития происходит формирование бластоцисты.
Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) – методика оплодотворения яйцеклеток приготовленной и очищенной спермой партнера (донора). Основана на добавлении фракции активно подвижных сперматозоидов.
Предварительно сперма центрифугируется и концентрируется. Таким образом, в малом объеме жидкости оказывается наибольшее количество сперматозоидов, способных оплодотворить ооциты.
Спустя 16-18 часов оцениваются пронуклеусы: то есть появление в яйцеклетки двух ядер: мужского и женского. Если ядра появились, значит сформировалась зигота – оплодотворенная яйцеклетка человека.
Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ) – механическое внедрение сперматозоида внутрь ооцита. С помощью специального манипулятора и микроинструментов – эмбриолог выбирает и отлавливает наиболее активный и морфологически нормальный сперматозоид, затем помещает его в ооцит.
ЭКО+ИКСИ, как правило, используется при наличии мужского фактора бесплодия или оплодотворение витрифицированных ооцитов.
При ИКСИ выбор сперматозоида для инъекции происходит субъективно: на основе морфологических характеристик.
ПИКСИ – метод, основанный на неспособности сперматозоида с незрелой ДНК связываться с гиалуроновой кислотой, позволяющий оценить не только морфологию, но и способность пройти природный барьер – оболочку яйцеклетки.
На чашки наносят гиалуроновую кислоту, сперматозоиды прикрепляются, далее эмбриолог с помощью микроинструментов забирает прикрепившиеся сперматозоиды, и производит процедуру ИКСИ.
IVM (In Vitro Maturation) – процедура основана на получении незрелых ооцитов на стадии GV, далее к таким ооцитам добавляют фолликулостимулирующие и лютеинизирующие гормоны, культивируют и получают зрелые ооциты (метафазы II), готовые к оплодотворению.
Данная методика показана для группы пациентов, которой невозможно провести симуляцию.
Герминальный везикул (GV); метафаза I (М I) – незрелая яйцеклетка (ооциты метафазы М I могут дозреть до метафазы М II)
Метафаза II (М II) – зрелая яйцеклетка.
Основная цель данного этапа – культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты для последующего переноса в полость матки или заморозки. Эмбрионы культивируются в специальных инкубаторах, которые подразделяются на «планшетные» и инкубаторы со встроенной системой Time-Lapse.
В клинике NGC все эмбрионы культивируются в инкубаторах со встроенной системой Time-Lapse.
Time-Lapse – система круглосуточного наблюдения за развитием эмбрионов в режиме реального времени. По сути, это специальный микроскоп, который устанавливается внутрь инкубатора. Он фотофиксирует и сохраняет изображения через регулярные короткие интервалы. Фотографирование каждого эмбриона происходит с момента оплодотворения и на протяжении всего периода инкубации.
Биопсия трофэктодермы – технология забора генетического материала у эмбриона, находящегося на стадии бластоцисты. Главная цель – получение клеток для дальнейшего проведение преимплантационного генетического тестирования (PGT-A NGS). Микроманипуляция производится, как правило, на 5/6/7 сутки развития эмбриона.
С помощью микроинструментов эмбриолог удерживает бластоцисту и захватывает несколько клеток трофэктодермы (оболочки бластоцисты).
Полученные клетки (биоптат) отмывают, помещают в пробирку и отправляют в генетическую лабораторию для последующего исследования. В Next Generation Clinic генетическая лаборатория расположена на базе клиники, что очень удобно и безопасно, ведь нет необходимости в транспортировке биоптатов.
Получение биологического материала для NiPGT эмбрионов – неинвазивная методика, которая может быть альтернативой стандартному PGT-A на клетках трофэктодермы. Забирается среда в которой рос и развивался эмбрион, в эту среду эмбрион в процессе развития выделяет ДНК, таким образом на основании исследования этой внеклеточной ДНК делается вывод о пригодности эмбриона к переносу.
Заморозка биоматериала и хранение его в криобанке – важный аспект работы эмбриологической лаборатории.
Заморозка используется в программах ЭКО с преимплантационной генетической диагностикой, программах «отложенного материнства», банкинга, сохранения фертильности. Также витрификация биоматериала позволяет организовывать банки донорского биоматериала.
Витрификация ооцитов – метод сверхбыстрого замораживания ооцитов с помощью проникающих в клетку криопротекторов, которые замещают воду и не допускают образования кристаллов воды. Клетки подвергаются воздействию криопротекторов, далее криоконсервируются в жидком азоте.
Криоконсервация спермы – метод сохранения сперматозоидов, с помощью непроникающих в клетки криопротекторов, который добавляют к эякуляту перед замораживанием. Он препятствует сморщиванию клеток, влияя на обмен ионов, и уменьшая образование кристаллов льда. Криоконсервация включает в себя процессы первоначальной выдержки в растворе криопротектора, охлаждение и хранение.
Витрификация эмбрионов – заморозка эмбрионов проводится методом витрификации. Необходимо добиться сохранения внутренней структуры и функциональных качеств эмбриона в процессе заморозки и разморозки. Это достигается правильным дегидратированием клеток, что исключает возможность образования кристаллов воды, которые могут повредить клетку. Поэтому вся процедура связана с замещением воды криопротекторами.
После заморозки биоматериал хранится в криобанке. Криобанк – это система хранения биологического материала (спермы, ооцитов, эмбрионов) пациентов клиники и доноров. Биоматериалы хранятся при температуре -196°С в сосудах Дьюара, наполненных парами жидкого азота. Они могут находиться там на протяжении многих лет.
При этом репродуктивные клетки сохраняют свою способность к оплодотворению без потери эффективности.
Для сохранения фертильности существуют возможности использования тканей яичника пациенток. Актуально для тех, кто планирует химио- или радиотерапию, а также оперативное лечение.
Для сохранения фертильности используют несколько методов:
2.1) В дальнейшем такие кусочки ткани можно трансплантировать обратно в организм пациентки. Такие трансплантаты способны вырабатывать гормоны, что очень важно для того чтобы избежать климакса у женщин с полностью удалёнными яичниками. Кроме того, существует возможность роста фолликулов в таких трансплантатах. Таким образом, у пациенток возможно наступления беременности естественным путем или с помощью вспомогательных репродуктивных технологий.
2.2) Не зрелые клетки после дозревание можно заморозить, либо оплодотворить и криоконсервировать уже полученные эмбрионы
